酶聯(lián)生物為您解析細(xì)胞培養(yǎng)基的種類

★ 無機(jī)鹽<o:p></o:p> 培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。<o:p></o:p> 培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素， 細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg 320 mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動。<o:p></o:p> 特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。 <o:p></o:p> ★ 氨基酸<o:p></o:p> 氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位，不同種類的細(xì)胞對氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。<o:p></o:p> 其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時，細(xì)胞生長不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。<o:p></o:p> 但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲存2周以上時，還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。 <o:p></o:p> ★ 碳水化合物<o:p></o:p> 碳水化合物是細(xì)胞生長主要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖，核糖，脫氧核糖，丙酮酸鈉和醋酸等。<o:p></o:p> ★ 維生素<o:p></o:p> 在細(xì)胞培養(yǎng)中，盡管血清是維生素重要來源， 但是許多培養(yǎng)基中添加了各種維生素以適合更多的細(xì)胞系生長。 <o:p></o:p> ★ 緩沖系統(tǒng)<o:p></o:p> 大多數(shù)細(xì)胞所需pH 在 7.2 - 7.4。但細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH （7.4 - 7.7）， 而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH （7.0 - 7.4）。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進(jìn)行緩沖，因此氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。<o:p></o:p> 如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為1。97g/L;如果CO2濃度維持在10%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為3。95g/L。<o:p></o:p> 細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。 HEPES 是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 - 7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g/L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。<o:p></o:p> 在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中，大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。 <o:p></o:p> ★ 其它成分<o:p></o:p> 在一些較為復(fù)雜的培養(yǎng)液中還包括其它一些成分。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM培養(yǎng)液，使用時還需要補(bǔ)加丙酮酸鈉和2-巰乙醇（2-Mercaptoethanol，2-Me）。<o:p></o:p> 2-Me 對細(xì)胞生長有很重要的作用。有人認(rèn)為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細(xì)胞增殖作用。2-Me的活性部分是硫氫基，其中一個重要作用是使血清中含硫的化合物還原成谷胱甘肽，能誘導(dǎo)細(xì)胞的增殖，為非特異性的激活作用。<o:p></o:p> 同時避免過氧化物對培養(yǎng)細(xì)胞的損害。另一個重要作用是促進(jìn)分裂原的反應(yīng)和DNA合成，增加植物凝集素（PHA）對淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化作用，已廣泛應(yīng)用于雜交瘤技術(shù)，另外，也開始用于一些難以培養(yǎng)的細(xì)胞。2-Me是一種小分子還原劑，極易氧化。<o:p></o:p> 分子量為78.13，純的2-Me是一種無色有刺激味的液體，比重為1.110-1.120（Do20），常用終濃度為5×10-5M，常配制成0.1M的儲存液，用時每升培養(yǎng)液加0.5ml。<o:p></o:p>

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